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雙縮脲試劑（用于鑒定蛋白質(zhì)的分析化學(xué)試劑）

次瀏覽 | 更新時(shí)間：2023-05-23

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雙縮脲試劑

用于鑒定蛋白質(zhì)的分析化學(xué)試劑

雙縮脲試劑是一種用于鑒定蛋白質(zhì)的分析化學(xué)試劑。它是一種堿性的含銅試液，呈藍(lán)色，由0.1 g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01 g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制而成。

雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí)，試液中的銅與多肽配位，絡(luò)合物呈紫色。可通過(guò)比色法分析濃度，在紫外可見(jiàn)光譜中的波長(zhǎng)為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml。

雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境，因此它可被其他堿，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，會(huì)延長(zhǎng)試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護(hù)反應(yīng)生成的絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?，從而使試劑失效?/span>

基本信息

中文名	雙縮脲試劑
外文名	Biuret Reagent
應(yīng)用	檢測(cè)含肽鍵的物質(zhì)，包括雙縮脲，蛋白質(zhì)等
主要成分	氫氧化鈉
制作	0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制而成
相關(guān)反應(yīng)	雙縮脲反應(yīng)

收起

簡(jiǎn)介

血清蛋白測(cè)定(雙縮脲法)試劑：球蛋白沉淀劑同上頁(yè)酚試劑法。雙縮脲試劑：硫酸銅(CuSO4·5H2O,三級(jí)試劑)1.5克，酒石酸鉀鈉(KNaC4H生O6·4H2O,三級(jí)試劑)6.0克2.5N氫氧化鈉，300毫升，蒸餾水。將硫酸銅及酒石酸分別各以200毫升蒸餾水溶解，必要時(shí)過(guò)濾，全部?jī)A入1,000毫升容量瓶中，混勻。再加入氫氧化鈉溶液并以蒸餾水稀釋至1,000毫升刻度。分裝塑料或內(nèi)壁涂蠟的試劑瓶，加塞密封，于室溫保存。若溶液中出現(xiàn)暗紅色沉淀即不宜再用。

反應(yīng)原理

需要注意的是，能與雙縮脲試劑發(fā)生紫色反應(yīng)的化合物分子中至少含有兩個(gè)肽鍵。因此，二肽無(wú)法用它來(lái)檢驗(yàn)。

配制

雙縮脲試劑A是質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 g/mL的NaOH水溶液；

雙縮脲試劑B是質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01 g/mL的CuSO4水溶液.

先在待測(cè)液中加入雙縮脲試劑A 3mL，振蕩均勻（營(yíng)造堿性環(huán)境），再加入1～2滴雙縮脲試劑B，振蕩均勻。如果待測(cè)液里含有蛋白質(zhì)，那么會(huì)看到溶液變成紫色。具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng)。

蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡(luò)合成紫色的絡(luò)合物。顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。

解釋

雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A和雙縮脲試劑B兩種試劑組成.

具體方法是

先將雙縮脲試劑A加入組織樣液，搖蕩均勻，在加入雙縮脲試劑B，搖蕩均勻。如果組織里含有蛋白質(zhì)，那么會(huì)看到溶液變成紫色。

應(yīng)用

雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵，或能過(guò)一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。

H2O

O=CC=O

HNNH

R-CHCH-R

O=CCuC=O

HNNH

R-CHCH-R

H2O

試劑作用

雙縮脲試劑可以驗(yàn)證蛋白質(zhì)的存在。

具體方法是：

先將雙縮脲試劑A加入組織樣液，振蕩均勻（必須營(yíng)造堿性環(huán)境），再加入雙縮脲試劑B，振蕩均勻。如果組織里含有蛋白質(zhì)，那么會(huì)看到溶液變成紫色。具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng)。蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡(luò)合成紫紅色的絡(luò)合物。顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。

雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。

雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，因蛋白質(zhì)中也有-CONH-基也可用于檢驗(yàn)蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)接觸后的顏色呈紫色。

與雙縮脲區(qū)別

雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。

雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A和雙縮脲試劑B兩種試劑組成

雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 g/mL的水溶液；

雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01 g/mL的水溶液。

雙縮脲試劑可以驗(yàn)證蛋白質(zhì)的存在，遇蛋白質(zhì)產(chǎn)生紫色。

簡(jiǎn)單的說(shuō)，雙縮脲是一種化學(xué)物質(zhì)，而檢測(cè)蛋白質(zhì)用的那兩個(gè)試劑之所以叫雙縮脲試劑，是因?yàn)闄z測(cè)原理和雙縮脲的形成相似。

方法學(xué)評(píng)價(jià)

雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物，在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，雙縮脲反應(yīng)產(chǎn)生的紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)，故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。

優(yōu)點(diǎn)：雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)的測(cè)定范圍是1~10mg蛋白質(zhì)，操作簡(jiǎn)單、快捷。既適合手工操作，又適合自動(dòng)化分析，重復(fù)性好、線性關(guān)系好，雙縮脲試劑可以長(zhǎng)期保存（若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn)，則需要重新配制）。

缺點(diǎn)：靈敏度差，測(cè)定范圍窄，樣品需要量大，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。干擾測(cè)定的物質(zhì)包括有：在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽(yáng)性呈色反應(yīng)，銅離子也容易被還原，有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀。

注意事項(xiàng)

在使用雙縮脲試劑時(shí)候，必須注意，必須是先加0.1g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01g/mL硫酸

雙縮脲試劑

銅的水溶液。(若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無(wú)法充分制造堿性環(huán)境，此時(shí)CuSO4會(huì)與NaOH發(fā)生復(fù)分解反應(yīng)，生成藍(lán)色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉淀，導(dǎo)致現(xiàn)象不清，無(wú)法較好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

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