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斐林試劑（檢驗還原性糖的試劑）

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斐林試劑

檢驗還原性糖的試劑

斐林試劑(Fehling's solution)是德國化學(xué)家赫爾曼·馮·斐林在1849年發(fā)明的。常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在。斐林試劑與單糖中的還原性糖（即醛糖）反應(yīng)生成磚紅色沉淀。

基本信息

中文名	斐林試劑
外文名	Fehling's solution
外觀	深藍色溶液
發(fā)明者	赫爾曼·馮·斐林
作用	鑒定可溶性的還原性糖的存在
發(fā)明時間	1849年
原料	氫氧化鈉溶液、硫酸銅溶液、酒石酸鉀鈉

收起

定義

斐林試劑

1849年，德國化學(xué)家斐林（Hermann vonFehling，1812年--1885年）發(fā)明了斐林試劑。它是由氫氧化鈉的含量為0.1 g/mL的溶液和硫酸銅的含量為0.05 g/mL的溶液，還有含量為0.2g/mL酒石酸鉀鈉配制而成的，其本質(zhì)是銅離子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合銅(高中認(rèn)為是新制的氫氧化銅)。

斐林試劑是二價銅離子的酒石酸鉀鈉配合物，可以被脂肪醛或還原性糖還原為氧化亞銅。斐林試劑為深藍色溶液，在與脂肪醛或還原性糖共熱時，藍色消失，析出紅色的氧化亞銅沉淀。在氧化亞銅析出過程中，反應(yīng)液的顏色可能經(jīng)過由藍色→綠色→黃色→紅色沉淀的逐漸變化，反應(yīng)較快時，直接觀察到紅色沉淀。

它與可溶性的還原性糖（葡萄糖、果糖和麥芽糖）在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。因此，斐林試劑常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。

配制方法

配制方法：0.1 g/mI NaOH(甲液)和0.05 g/mI CuSO(乙液)。甲液配制方法是將125 g氫氧化鈉和137 g酒石酸鉀鈉溶于500 mI，蒸餾水中(貯于帶橡皮塞的瓶中)。乙液配制方法是將34.5 g結(jié)晶硫酸銅溶于500 ml水中，加0.5 mI硫酸。混合均勻。

斐林試劑的使用方法：一般將斐林試劑甲液和乙液等體積混合(或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液)，再將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱。如待測液中存在還原糖，則呈現(xiàn)磚紅色沉淀；如待測液中不存在還原糖，則仍然呈藍色。

還原糖實驗

1：向試管內(nèi)注入2ml待測組織樣液。

2：向試管內(nèi)注入1ml斐林試劑（甲乙液混合均勻，甲液量較多，乙液只需少量。然后再注入）?！救私贪娓咭簧锉匦抟坏谑隧撜f的是“甲乙液等量混合均勻后再注入】

3：將試管放入盛有50~65℃溫水的大燒杯中加熱約2min。

4：觀察試管中出現(xiàn)的顏色變化。

(應(yīng)為淺藍色-----棕色——磚紅色（沉淀）)

核糖、[麥芽糖、葡萄糖、果糖]（還原性糖）均為磚紅色沉淀；蔗糖、淀粉無變化（因為蔗糖、淀粉為非還原性糖）。

區(qū)別

班氏試劑

斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區(qū)別，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結(jié)。

（1）班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：

①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉；

②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；

③把CuSO溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產(chǎn)生沉淀可濾去。

（2）其反應(yīng)原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應(yīng)生成酒石酸絡(luò)銅離子

酒石酸絡(luò)銅離子和可溶性還原糖在加熱條件下反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀。而班氏試劑中的產(chǎn)生卻是這樣的：檸檬酸鈉作為絡(luò)合劑，由碳酸鈉提供堿性。CuSO與檸檬酸鈉溶液和NaCO溶液混合時生成檸檬酸絡(luò)銅離子，檸檬酸絡(luò)銅離子與葡萄糖中的醛基反應(yīng)生成磚紅色沉淀。

（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙混合后會因酒石酸有一定的還原性而自發(fā)地緩慢產(chǎn)生氧化亞銅沉淀，因此斐林試劑一般為現(xiàn)用現(xiàn)配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉比較穩(wěn)定，實際堿性也不強，不易還原銅離子產(chǎn)生氧化亞銅沉淀，因此該試劑可長期保存。

當(dāng)然，無論用班氏試劑還是斐林試劑，歸根結(jié)底都是二價銅與醛基在沸水浴加熱條件下反應(yīng)而生成磚紅色的沉淀，兩者反應(yīng)現(xiàn)象一樣，這就是二者的相同之處。

雙縮脲試劑

斐林試劑和雙縮脲試劑

斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液（斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉）和CuSO溶液組成，但二者有如下三點不同：

（1）溶液濃度不同

CuSO溶液稱為斐林試劑乙，其濃度為0.05 g/mL；

CuSO溶液（雙縮脲試劑B）的濃度為0.01 g/mL。

（2）使用原理不同

斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應(yīng)，被還原成磚紅色的沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉淀）。

鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發(fā)生的是雙縮脲反應(yīng)。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng)。蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu 絡(luò)合成紫紅色的化合物。顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。

（3）使用方法不同

斐林試劑使用時，先等體積混合甲、乙兩液，而后立即使用，反應(yīng)需要加熱（有時不加熱也反應(yīng)）；雙縮脲試劑使用時，先加入NaOH溶液（1mL），振蕩搖勻，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，然后再加入3~4滴CuSO溶液，振蕩搖勻后觀察現(xiàn)象。

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