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巰基
具有特殊生理功能的基團
基本信息
| 中文名 | 巰基 |
| 別名 | 氫硫基；硫醇基 |
| 外文名 | sulfhydryl group |
| 化學式 | —SH |
| 性質(zhì) | 具有臭味，弱酸性、易被氧化 |
| 拼音 | qiú jī |
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介紹
性質(zhì)：具有臭味，弱酸性、易被氧化。
巰基與二硫鍵的相互轉(zhuǎn)化
體內(nèi)含有巰基的功能蛋白主要是通過巰基與二硫鍵的相互轉(zhuǎn)化來實現(xiàn)其功能的。在體內(nèi)和人工條件下 , 二者之間實現(xiàn)著互相轉(zhuǎn)化的過程。在體內(nèi)自然狀態(tài)下 , 二硫鍵與巰基的相互轉(zhuǎn)化主要是通過巰基 /二硫鍵氧化還原酶的催化而實現(xiàn)的。天然二硫鍵的形成是許多蛋白正確折疊中的限速步驟 , 在穩(wěn)定蛋白質(zhì)構象和保持蛋白質(zhì)活性方面起重要作用。在體外人工環(huán)境下 , 從氨基酸水平來看 , 半胱氨酸在堿性溶液中易被氧化形成二硫鍵 , 生成胱氨酸。氧化和還原劑均可打開二硫鍵。在研究蛋白質(zhì)結(jié)構時 , 氧化劑過甲酸可定量拆開二硫鍵 , 生成相應磺酸。還原劑如巰基乙醇、巰基乙酸也能拆開二硫鍵 ,生成相應巰基化合物。由于半胱氨酸中巰基很不穩(wěn)定 ,極易氧化 , 因此利用還原劑拆開二硫鍵時 , 往往進一步用碘乙酰胺、氯化芐、N-乙基丁烯二亞酰胺和對氯汞苯甲酸等試劑與巰基作用 , 將其保護起來 , 防止其重新氧化。
含巰基的有機物
檢測方法
1. RP-HPLC法測定巰基含量
采用色譜柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm)，流動相A(0.1%TFA)和流動相B（甲醇）梯度洗脫：流動相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速0.8mL/min，檢測波長327nm，得到NTB標準曲線y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l.17%，從而建立了一種高靈敏度巰基檢測方法。
2. 采用分子熒光光譜法作為反應條件，用反相高效液相色譜梯度洗脫法測定巰基
用OPA、丹酰氯、茚三酮與半胱氨酸反應，測其可見紫外吸收光譜及熒光光譜；在不同PH、溫度、反應時間條件下，用OPA與半胱氨酸反應測其熒光度；分別吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlHO,室溫下反應30min，然后加熱蒸干，殘渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min時測其熒光光譜。取pH8.4的硼酸緩沖溶液 5μl，混合10次；加入OPA衍生液2μl，混合進樣走HPLC。梯度條件：洗脫液B所占比例0min為0，17min線性增加至60%，17.5min線性增加至100%，20min洗脫結(jié)束。激發(fā)波長為340nm,熒光檢測波長為450nm。
3.柱前衍生高效液相色譜-紫外檢測法
以tris(2-carboxylethyl) – phosphine (TCEP)為還原劑，7–fluorbenzo–2–oxa –1,3– diazole– 4-sulfonate(SBD-F)為衍生劑，N-乙酰半胱氨酸為內(nèi)標，C8色譜柱分離，流動相為甲醇 -磷酸鹽緩沖液（pH =3. 0）,梯度洗脫 ,385 nm處檢測。線性范圍為8. 3～1042. 6 μmol/L,最低檢測限為 0.42μmol/L,日內(nèi)精密度為1.67%～1.86%,日間精密度為 2.08%～3.06 %,平均回收率為 98.1%～103.2 %。
4. 電化學脫附與熒光技術聯(lián)用
5.拉曼光譜法
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